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凝胶成像系统操作步骤及详细介绍
点击次数:924 发布时间:2018-04-25

凝胶成像系统

凝胶成像即对DNA/RNA/蛋白质等凝胶电泳不同染色(如eb、考马氏亮蓝银染sybr green)及微孔板、平皿等非化学发光成像检测分析。凝胶成像系统可以应用于分子量计算,密度扫描,密度定量,PCR定量等生物工程常规研究。

定义

凝胶成像即对dna/rna/蛋白质等凝胶电泳不同染色(如eb、考马氏亮蓝银染sybr green)及微孔板、平皿等非化学发光成像检测分析。凝胶成像系统可以应用于分子量计算,密度扫描,密度定量, PCR定量等生物工程常规研究。

原理

样品在电泳凝胶或者其他载体上的迁移率不一样,以标准品或者其他的替代标准品相比较就会对未知样品作一个定性分析。这个就是图像分析系统定性的基础。根据未知样品在图谱中的位置可以对其作定性分析,就可以确定它的成份和性质。

样品对投射或者反射光有部分的吸收,从而照相所得到的图像上面的样品条带的光密度就会有差异。光密度于样品的浓度或者质量成线性关系。根据未知样品的光密度,通过于已知浓度的样品条带的光密度指相比较就可以得到未知样品的浓度或者质量。这就是图像分析系统定量的基础。采用zui新技术的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均匀,zui大限度的消除了光密度不均造成的对结果的影响。

应用范围

总体上来说凝胶成像可应用于:凝胶成像系统可以用于:蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析

1)分子量定量

对于一般常用的DNA胶片,利用分子量定量功能,通过对胶上DNA Marker条带的已知分子量注释,自动生成拟合曲线,并以它衡量得到未知条带的分子量。通过这种方法所得到的结果较肉眼观察估计要准确很多。

2)密度定量

一般常用的测定DNA(脱氧核糖核酸)RNA(核糖核酸)浓度的方法是紫外吸收,但它只能测定样品中的总核苷酸浓度,而不能区分各个长度片段的浓度。利用凝胶成像系统和软件,先将DNA胶片上某一已知其DNA含量的标准条带进行密度标定以后,可以方便的单击其他未知条带,根据与已知条带的密度做比较,可以得到未知DNA的含量。此方法也适用于对PA GE蛋白胶条带的浓度测定。

3)密度扫描

分子生物学和生物工程研究中,zui常用到的是对蛋白表达产物占整个菌体蛋白的百分含量的计算。传统的方法是利用专用的密度扫描,但利用生物分析软件结合现在实验室常规配备的扫描仪或者直接用白光照射的凝胶成像就能完成此项工作。

4PCR定量

PCR定量主要是指,如果PCR实验扩增出来的条带不是一条,那么可以利用软件计算出各个条带占总体条带的相对百分数。就此功能而言,与密度扫描类似,但实际在原理上并不相同。PCR定量是对选定的几条带进行相对密度定量并计算其占总和的百分数,密度扫描时并对选择区域生成纵向扫描曲线图并积分。

种类

1)普通凝胶成像分析系统:可以对蛋白电泳凝胶,DNA凝胶样品进行图象采集并进行定性和定量分析,样品包括:EBSYBR GreenSYBR GoldTexas RedGelStarFluoroscecinRadiant Red等染色的核酸监测;以及Coomassie BlueSYPRO Orange、各种染色的蛋白质凝胶如考染等。(或UV,EB和有色及可见样品成像);

2化学发光成像分析系统:成像范围涵盖UV,EB,化学发光、紫外-荧光、有色及可见样品成像;

3)多色荧光成像分析系统:成像范围涵盖UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像;

4)多功能活体成像分析系统:UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像和离体组织和小型动物,及大型型动物。

特点

以某一品牌凝胶成像 为例:

高分辨率像素: 

140万、200万、300万高像素专业数字CCD摄像头,分析图像更清晰,分辨率更高。

多种光源可选:

可由触措键控制开关的四种312nmUV254nmUV365nmUV及白光,扩展了应用范围。

推拉式工作台: 

方便装卸清洁,易于实验操作,人性化设计。

独特的风扇及密闭风道设计:

紫外工作台及主机装备有排风风扇,主机侧壁内有SIM独家设计的密闭排风通道,有效降低室内温度,zui大程序减小对样品的影响,避免测试过高使胶弥散过快。

密封设计:

可保护操作者免受漏出紫外光的辐射。

先进的暗箱技术,操作安全:

密封效果好保证了图片的获取和UV的传输。

操作步骤

1.打开凝胶成像系统开关。

2.打开电脑,打开并进入成像软件。

ECL拍摄

将拍摄模式切换为“ECL模式,将滤光轮转到ECL位。选择合适拍摄分辨率(有像素合并功能的机器都有这个功能),点击启动。将样品放置在样品台正中间,调整镜头的焦距使样品占据窗口约80%左右,,然后点击自动曝光,勾掉负片并调整聚焦使预览窗口中的样品图像清晰.光圈越大,自动曝光所需时间越短。)并先用单帧拍摄,拍摄一张Mark照片。关闭反射白光后给放置在化学发光成像板上的硝酸纤维素膜均匀加上发光液。将拍摄方式设置为规则积分,勾上负片,并设置的时间和张数,点击拍摄按钮即可。

普通凝胶拍摄

1.将拍摄模式切换为普通模式,将滤光轮转到UV位(无绿光镜轮的无需调整)。

2.选择合适拍摄分辨率(机器有像素合并功能),点击启动

3. DNA胶拍摄:DNA胶放置在紫外台正中间,调整焦距使样品占据窗口约80%左右,,然后点击自动曝光,并调整聚焦使预览窗口中的样品图像清晰.然后关闭反射白光,开启透射紫外,并微调,确保在紫外下处于清晰状态。

蛋白质胶拍摄:将蛋白质胶放在拆叠白光板的中间,关闭反射白光,开启透射白光,然后点击自动曝光,并调整聚焦使预览窗口中的样品图像清晰.

4.软件界面点击拍摄按钮即可。

常见问题

1、是不是像素越高,产品就越好?

像素是要针对成像设备来看的,比如数码相机与CCD的像素就不具备可比性,其次CCD本身的质量比单纯的像素高低更重要。对于同级别CCDzui重要的指标是其大小,也就是CCD尺寸,尺寸越大其本身价值就成几何倍地增长。

2、配件紫外反射灯源的主要用途为何?

紫外反射灯源使用并不广泛,主要是提供非透明材质的DNA跑胶载体如纸层析等的成像需要而使用。由于比较常用的还是透明的琼脂糖凝胶聚丙烯酰胺凝胶,透射光源完全可以满足,因此将紫外反射光源作为选配件不列入标配中。

3、能否在凝胶成像上直接切胶?

凝胶成像可以,如需直接切胶,首先按系统中间的观察窗,打开装有进口防紫外玻璃的观察窗口,然后打开左右两侧专为割胶所设计的小门,即可进行切胶操作。

4、如何调节焦距聚焦 光圈以获得高质量的图片?

三个zui重要的可调参数分别是焦距聚焦和光圈。其中焦距调节清晰度,聚焦调节图像大小,光圈调节明暗。一般先把光圈调节到适宜的亮度后,再调节聚焦将图像放到zui大,zui后调解焦距,在图像较大的情况下焦距比较容易调节到zui清晰状态,然后再把图像缩放在适宜大小后成像即可。

 

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